胰岛素ELISA试剂盒主要由标记试剂(R1)和固相试剂(R2)组成。标记试剂组成:吖啶翁酯标记鼠抗胰岛素单克隆抗体、碟丹化钠、牛血清白蛋白;固相试剂组成:顺磁性颗粒结合鼠抗胰岛素单克隆抗体、碟丹化钠、牛血清白蛋白。
用夹心ELISA试剂盒测定人胰岛素水平。用纯化的人胰岛素自身抗原包被微孔板制成固相抗原。将胰岛素自身抗体依次加入包被的微孔板中,与HRP标记的胰岛素自身抗原结合,形成抗原-抗体-酶标记的抗原复合物。洗涤后,加入TMB显色。
胰岛素ELISA试剂盒的实验步骤及计算方法介绍:
一:本产品的使用步骤如下
1)将所需数目的板条置于板架上。。
2)用一次性吸嘴将标准品﹑质控品和样品分别25μL加入相应的检测孔中。
3)每孔加入25μL的酶联物。
4)充分混合10秒,在此步骤中充分混合非常重要。
5)室温下温育30分钟。
6)快速丢弃测试孔中的内容物,向每个孔中加入400μl洗涤液,将板洗三次,并在吸水纸上拍打干燥,以除去残余液体。注:清洗过程的正确操作将显着影响实验的灵敏度和准确性。
7)每孔加入50μL的酶复合物。
8)在室温下温育30分钟。
9)快速弃去检测孔中的内含物,每孔加入400μL的洗涤液洗板三次,在吸水纸上拍干以除去残余液体。
10)每孔加入50μL的底物液。
11)在室温下温育15分钟。
12)每孔加入50μL的终止液终止反应。
13)在加终止液后10分钟内于450±10nm处读取OD值。
二:胰岛素ELISA试剂盒计算结果
1)计算标准品﹑质控品和病人样品的平均吸光度。
2)以吸光率为Y轴,浓度为X轴,按照从标准品中获得的平均吸光率和其相对应的浓度值,绘制一条标准曲线。
3)利用样品的平均吸光率,在标准曲线上得出其相应的浓度值,
4)自动方法:使用计算机三次方模式﹑四参数模式或双对数函数的计算机程序可得到结果。
5)样品的浓度可直接从标准曲线中获得。如果样品的浓度高于高标准,则需要进一步稀释。计算浓度时,乘以样品的稀释倍数。